CHO细胞是最早由Theodore Puck于1956年从中国仓鼠卵巢细胞中分离出来◈✿ღ✿,并被发现可以无限分裂的细胞◈✿ღ✿,是成纤维细胞的一种◈✿ღ✿。CHO细胞因为具有可粘附或悬浮生长向日葵app下载汅api免费丝瓜ios在线观看◈✿ღ✿、易基因突变◈✿ღ✿、易基因转染◈✿ღ✿、可实现蛋白翻译后修饰和化学选择等特点◈✿ღ✿,被广泛认为是优良的哺乳动物基因表达的宿主细胞◈✿ღ✿。它很少分泌CHO内源性蛋白凯发k8国际凯发k8官方旗舰厅◈✿ღ✿,◈✿ღ✿,因此非常有利于靶蛋白的分离和纯化◈✿ღ✿。由于该细胞存在缺少脯氨酸合成基因的遗传缺陷k8凯发天生赢家一触即发◈✿ღ✿,因此在培养过程中需在培养基中加入l -脯氨酸才能生长向日葵app下载汅api免费丝瓜ios在线观看◈✿ღ✿。
于1957年诞生◈✿ღ✿,是早期CHO细胞的亚克隆◈✿ღ✿,属于接近野生型细胞凯发k8国际◈✿ღ✿。但在1968年的突变分析表明◈✿ღ✿,CHO-K1细胞缺乏甘氨酸生物合成的基因◈✿ღ✿。因此其细胞系冷冻溶液的组成通常为50%基础培养基+40%胎牛血清+10%DMSO◈✿ღ✿;培养基组成通常为Hams F-12K+10% FBS+1%双抗凯发k8国际◈✿ღ✿。
DHFR系二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase)的缩写◈✿ღ✿。DHFR被用来催化二氢叶酸还原为四氢叶酸向日葵app下载汅api免费丝瓜ios在线观看凯发k8国际◈✿ღ✿。该细胞系由于存在DHFR缺陷◈✿ღ✿,不能合成四氢叶酸向日葵app下载汅api免费丝瓜ios在线观看◈✿ღ✿,它只能导入DHFR或在添加次黄嘌呤和胸腺嘧啶的培养基才能生长◈✿ღ✿。也因此◈✿ღ✿,DHFR可作为筛选标记或报告基因◈✿ღ✿。
CHO-DXB11(也称为DUKX)属于DHFR缺陷细胞◈✿ღ✿,是1980年由CHO-K1的细胞化学突变衍生而来◈✿ღ✿。CHO-DXB11只敲除了一个位点◈✿ღ✿,而另一个位点为错义突变◈✿ღ✿,因此有可能自动恢复到DHFR功能◈✿ღ✿,因此无法使用DXB11进行筛选◈✿ღ✿。
诞生于1983年CHO-DG44也属于DHFR缺陷细胞◈✿ღ✿,与CHO-DXB11不同的是◈✿ღ✿,CHO-DG44有一个DHFR双缺陷◈✿ღ✿,有两个位点被敲除◈✿ღ✿,因此DG44可用于筛分◈✿ღ✿,在工业应用上最为广泛◈✿ღ✿。
CHO-K1◈✿ღ✿、CHO-DG44和CHO-S是工业生产中最常见的三种细胞系◈✿ღ✿。甲氨蝶呤(MTX)是DHFR的拮抗剂◈✿ღ✿,可增加DHFR的表达向日葵app下载汅api免费丝瓜ios在线观看向日葵app下载汅api免费丝瓜ios在线观看◈✿ღ✿,使外源基因的拷贝数得到扩增和高表达◈✿ღ✿。DGFR基因扩增系统是目前最常用的基因扩增选择系统◈✿ღ✿。但该系统也存在一些不足◈✿ღ✿,如该方法所需MTX浓度较高◈✿ღ✿,外源基因表达量较低◈✿ღ✿,增加了筛选细胞克隆的工作量等◈✿ღ✿。
因此凯发k8天生赢家一触即发◈✿ღ✿!◈✿ღ✿,以谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase◈✿ღ✿,GS)基因作为显性基因扩增选择标记的GS- CHO细胞(原始宿主细胞为CHO-K1)应运而生◈✿ღ✿。GS-CHO细胞又被称为CHO -K1SV细胞◈✿ღ✿,于1987年初次报道◈✿ღ✿。GS细胞可以在没有谷氨酰胺的培养基中生长◈✿ღ✿,具有更高的扩增效率◈✿ღ✿。将靶基因(如mab)和GS基因标记载体转染后◈✿ღ✿,再通过甲硫氨酸二甲基亚砜(MSX)选择压力促进转染基因扩增◈✿ღ✿,获得重组细胞株凯发k8◈✿ღ✿!◈✿ღ✿。
CHO细胞可用于表达多种复杂的重组蛋白◈✿ღ✿。据统计◈✿ღ✿,70%以上的动物细胞表达的制剂是由CHO细胞作为宿主表达的◈✿ღ✿。2011年6月批准的27个单克隆抗体中◈✿ღ✿,有13个(约50%)通过CHO细胞表达凯发k8国际◈✿ღ✿。